elispot(IFN-γ ELISpot方法评估疫苗)--go百科网

IFN-γ ELISpot办法评价疫苗

除针对新冠病毒的Ad5重组卵白疫苗外，其他病毒的重组卵白疫苗、灭活疫苗、DNA疫苗等在进入临床大概临床前一阶段的生物实行的研讨中，都是选择的IFN-γ ELISpot办法评价疫苗惹起的细胞免疫效应。为什么是ELISpot这种办法，不是ELISA?为什么是IFN-γ这个目标，不是其他的细胞因子？

为什么是ELISpot？

在免疫学范畴中，干系疾病和疫苗的研讨等均是基于体液的免疫应对（Humoral Mediated Immune Response，HMI）和细胞介导的免疫应对（Cell Mediated Immune Response，CMI）为基本。在以往的免疫应对研讨机制中常使用酶联免疫吸附法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）来检测体液中游离的细胞因子或抗体，但由于游离的循环抗体或细胞因子的半衰期不同，使之在体液中不休的被代谢或与靶器官团结，因此ELISA并不克不及真实反应体内抗体及细胞因子的实践水平。

自1983年，Sedgwick和Czerkinsky团结了细胞培养武艺和ELISA武艺，创建了体外检测特异性分泌抗体细胞（Antibody-Secreting Cells， ASCs）和分泌细胞因子（Cytokine，CK）细胞的固相酶联免疫斑点武艺（Enzyme-Linked Immunospot Assay，ELISpot），可从单细胞水平检测分泌抗体细胞或分泌细胞因子细胞的一项细胞免疫学检测武艺。由于该法及高敏捷度，特异性强，高通量，单细胞水平，功效性检测以及低本钱等诸多优点于一身，是研讨Th1/Th2的反响，疫苗研制，病毒影响的检测和医治，肿瘤学，影响性疾病，本身免疫性疾病和器官移植的抱负东西。

为什么是IFN-γ？

IFN-γ作为免疫活性细胞分泌的细胞因子在诱导抗病毒免疫中起偏紧张的免疫调治作用，包含激活细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic lymphocyte,CTL）、天然杀伤细胞（natural killer cell，NK）细胞和吞噬细胞等，而在疫苗免疫后机体产生IFN-γ的水平实践上反应帮助性T细胞的活动。因此，检测IFN-γ的水平就是直接地检测帮助性T细胞活性。现在，检测IFN-γ的水平以前渐渐代替种种传统的细胞免疫检测伎俩，成为检测细胞免疫后果的一种紧张办法。

因此，创建IFN-γ ELISpot检测办法，可以作为检测和评价疫苗细胞免疫的好效办法，现在也已成为疫苗惹起的细胞免疫效应评价的“金标准”。

IFN-γ ELISpot试剂盒：

人干扰素Y 酶联免疫斑点法基本试剂盒（ALP），3420-2A

人干扰素Y 酶联免疫斑点法基本试剂盒（HRP），3420-2H

人干扰素Y 酶联免疫斑点法PLUS（ALP），3420-4APT-2

人干扰素Y 酶联免疫斑点法PLUS（HRP）， strips3420-4HST-2

IFN-γ Elispot武艺原理：

A.用抗IFN-γ的单克隆抗体包被在检测孔的底部；

B.分散待检测样本的淋巴细胞；

C.将待测细胞放入检测孔，同时到场兴奋物。在培养时期，对兴奋物有反响的T淋巴细胞就会被激活，开头分泌特定的细胞因子IFN-γ，这些细胞因子同时被板底的单克隆抗体捕捉；对兴奋物没有反响的细胞则不受兴奋，也不分泌特定的细胞因子IFN-γ;

D.移出细胞，板底留下细胞因子的潜伏“影像”;

E.到场生物素标志的检测抗体，检测抗体与“影像”上的细胞因子团结，构成“抗体-抗原-抗体”的夹心布局；