血球计数板(血细胞计数板)

一、血球计数板的使用原理

25中方格×16小方格型的计数板 寻常计数四个角和中央的五此中方格（80个小方格）的细胞数。计数反复3次，取其均匀值。计数终了后，依下列公式盘算：

酵母细胞个数／1mL ＝80个小方格细胞总数/ 80 ×400×10000×浓缩倍数

16中方格×25小方格型的计数板 寻常取四角：1、4、13、16四此中方格（100个小方格）计数。将每一中格扩大，可见25个小格。计数反复3次，取其均匀值。计数终了后，依下列公式盘算：

酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/ 100 ×400×10000×浓缩倍数

二、血球计数板的使用办法步调

使用血球计数板计数时，依照如下的实行步调举行：

1．镜检计数室。在加样前，先对计数板的计数室举行镜检。如有污物，则需洗濯，吹干后才干举行计数；

2．加样品。将干净干枯的血球计数板的计数室上加盖自用的盖玻片，用吸管吸取浓缩后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边沿，让培养液自行徐徐渗入，一次性充溢计数室，避免产气愤泡，充入细胞悬液的量以不凌驾计数室台面与盖玻片之间的矩形边沿为宜。多余培养液可用滤纸吸去；

3．计数。稍待半晌（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到计数室地点地点后，再转换高倍镜察看、计数并纪录。

三、血球计数板的使用注意事项

《培养液中酵母菌种群数目标动态厘革》实行是一个历时较长（7天支配）的实行，事前一定要做好周到的方案，定步骤、定时间、定职员。天天接纳抽样检测法使用血球计数板对酵母菌举行计数，在计数时应从以下几方面注意。

1．天天同一时间，各组取出本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作纪录，一连察看7天。

2．从试管中吸出培养液举行计数之前，要将试管悄悄震荡几下，如此使酵母菌分布匀称，避免酵母凝结沉淀，提高计数的代表性和准确性，求得的培养液中的酵母菌数目偏差小。

3．假如一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液举行浓缩以便于酵母菌的计数。具体办法是：摇匀试管，取1mL酵母菌培养液，到场成倍的无菌水浓缩，浓缩n倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以浓缩倍数。以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜。特别是在培养终期的样液必要浓缩后计数。

4．活酵母有芽殖征象，若芽体到达母细胞轻重的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。

5．关于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，寻常可接纳“数上线不数下线，数左线不数右线”的准则处理，另两边不计数。计数时，假如使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4此中格(即100个小格)的酵母菌数；假如规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一此中格(即80个小方格)的酵母菌数。

6．计数一个样品要从两个计数室中计得的均匀数值来盘算，对每个样品可计数三次，再取其均匀值。计数时应不时调治焦距，才干察看到不同深度的菌体。按公式盘算每1ml（或10mL）菌液中所含的酵母菌个数。

7．血球计数板的干净

血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等天然溶剂脱水使其干枯。经过镜检察看每小格内对否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必需反复洗濯直到干净为止。